В последние десятилетия 20 века широкая практика использования антибиотиков и экологическое неблагополучие окружающей среды привели к радикальной смене микроокружения в сообществе живых организмов. Эволюционно созданный в процессе естественного отбора устойчивый бактериальный микробиоценоз исчез, нарушилось эндоэкологическое равновесие, созданное в ходе эволюции в пользу вирусного и грибкового микроокружения, на которое антибактериальные средства действия не оказывают [12, 13]. На фоне общности перечня и механизмов влияния многочисленных внешних и внутренних факторов проблема дисбиоза и дисбактериоза стала общей для человека и животных. Обозначилась острая необходимость изучения микробиоценоза живого организма и поиска все более эффективных методов его коррекции [1, 2, 4, 5, 6, 7, 10].

В связи с этим разработка новых препаратов на основе штаммов микробов, формирующих нормальную микрофлору кишечника, является в настоящее время актуальной и значимой [3, 11, 14, 15].

В настоящее время бактериальные препараты, рекомендуемые для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта у млекопитающих, представлены широчайшим перечнем эубиотиков, пребиотиков, пробиотиков и симбиотиков. Именно симбиотики и пребиотики в последнее время представляются наиболее перспективными при лечении и профилактике дисбактериоза. Анализ показывает, что в основу большинства наиболее эффективных препаратов симбиотического действия входят различные штаммы лактобактерий и их метаболитов. Это обусловлено многочисленными биологическими свойствами лактобактерий. Кроме того, лактобактерии — это микроорганизмы, которые достаточно легко культивируются как в лабораторных, так и в производственных условиях. В то же время известно, что лечебное действие существующих препаратов, включая пробиотики, пребиотики и симбиотики, зависит не только от набора факторов антагонистической активности и иммуномодулирующих свойств их штаммов, но и от оригинальных дополнительных ингредиентов.

С учетом вышеизложенного нами разработан и испытан новый биологически активный препарат «Эмбриоприм» (патент РФ № 230368), рекомендуемый для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника и устранения сопутствующих им функциональных расстройств организма у животных. Основным микробным компонентом препарата является сублимированная культура Lactobacillus acidophilus ЕР 317\402 ЕР 317\402, а немикробная субстанция представлена эмбрионально-яичной массой кур, активированной по оригинальной авторской технологии и вспомогательным компонентом — измельченной скорлупой куриного яйца, кальций которой переводится, в процессе взаимодействия с добавленной в препарат янтарной кислотой, в активную, легко усвояемую форму.

С учетом сложности патогенеза дисбиоза и дисбактериоза, критериями оценки эффективности коррекционных мероприятий, прежде всего, служит восстановление нормального состава микрофлоры толстого кишечника или положительная динамика в его количественных и качественных характеристиках, что сопровождается улучшением общего состояния человека или животного, положительной динамикой биохимических, гематологических, иммунологических показателей крови. Поэтому в качестве ведущей характеристики оценки влияния нового препарата на организм нами выбраны бактериологические показатели кишечного содержимого экспериментальных животных.

Материал и методы исследования: с целью изучения эффективности препарата поэтапно были отобраны 30 условно здоровых собак различных пород в возрасте двух месяцев. Использование животных раннего возраста сводило к минимуму вероятность воздействия посторонних факторов и обеспечивало идентичность рациона кормления. Перед началом эксперимента провели бактериологические исследования содержимого кишечника всех собак, затем на протяжении 10 дней применяли перорально антибиотик — доксициклина гидрохлорид в дозе 2 мг/кг один раз в сутки. Через пять дней после скармливания антибиотика исследования качественного и количественного состава микроорганизмов кишечника повторили.

Затем всем собакам на протяжении 20 дней применяли новый препарат «Эмбриоприм», с последующим контролем бактериологических показателей содержимого кишечника. Все эксперименты на животных проводились в соответствии с правилами защиты позвоночных животных, используемых в научных целях [8, 9].

Полученные результаты свидетельствуют, что до начала курса антибиотикотерапии показатели микробиоценоза соответствовали установленной возрастной норме. Десятидневный курс доксициклина гидрохлорида вызвал у щенков дисбактериоз второй-третьей степени. У 100% щенков после приема антибиотика существенно увеличилось содержание грибов рода кандида, при этом число колоний на агаре Сабуро в чашках Петри достигало 100 и более. В то время как до приема антибиотика грибы рода кандида обнаруживались в значительно меньшем количестве (в среднем 15 колоний на чашке Петри) лишь у 13% животных.

У животных, при проведении бактериологического контроля эффективности применения эмбриоприма, полученные результаты сравнивали с показателями микробиоценоза до и после приема антибиотиков. Из результатов, представленных в таблице 1 следует, что все основные представители индигенной микрофлоры (бифидо-, лактобактерии, бактероиды) выделялись у 100% животных на всех этапах эксперимента. Однако их количество после применения эмбриоприма не только возросло по сравнению с периодом после применения антибиотика (соответственно в 2,5, 1,7 и 2,1 раза), но и превысило на 0,11 lg КОЕ/г, 0,32 lg КОЕ/г и 0,39 lg КОЕ/г соответственно, количественные показатели содержания этих микроорганизмов до начала эксперимента.

Таблица 1 — Влияние препарата «Эмбриоприм» на бактериальные показатели микробиоценоза кишечника у щенков с экспериментальным антибиотикассоциированным дисбактериозом.

Микрофлора

Время исследования кишечного содержимого щенков

до приема антибиотиков, n=30

 

через 5 сут. после курса доксициклина гидрохлорида, n=30

через 5 сут. после окончания курса приема «Эмбриоприма», n=30

Кол-во

lg КОЕ/г

Выделено,

гол.(%)

Кол-во

lg КОЕ/г

Выделено,

гол.(%)

Кол-во

lg КОЕ/г

Выделено,

гол.(%)

Патогенные микробы семейства кишечных

0

0

0

0

0

0

Бифидобактерии

8,78±0,74**

30 (100)

3,46±0,33

30 (100)

8,89±0,65**

30 (100)

Бактероиды

5,63±0,61**

30 (100)

3,23±0,47

30 (100)

5,95±0,57**

30 (100)

Лактобактерии

8,95±0,49**

30 (100)

4,52±0,51

30 (100)

9,34±0,56**

30 (100)

Эшерихии

с норм. ферм. акт-ю

со сниж. ферм. акт-ю

лактозонегативные

гемолитические

 

6,47±0,43**

0

0

0

 

30 (100)

0

0

0

 

3,28±0,83

4,65±0,37

3,66±0,52

3,15±0,63

 

30 (100)

30 (100)

30 (100)

19 (63)

 

5,90±0,58**

0

0

0

 

30 (100)

 

 

 

Энтерококки

6,83±0,56*

30 (100)

3,18±1,23

30 (100)

6,13±0,54*

30 (100)

УПЭ

Klebsiella

Hafnia

Enterobacter

Proteus

Serratia 

Clostridium

 

0

0

2,32±0,36*

0

0

0

 

0

0

21 (70)

0

0

0

 

3,56±0,32

0

5,72±0,71

4,17±0,46

0

2,21±0,57

 

8 (27)

 

30 (100)

6 (20)

 

7 (23)

 

0

0

3,11±0,28*

0

0

0

 

 

 

16 (53)

 

 

 

Стафилококки

St. aureus

 St.  epidermidis

 

0

0

 

0

0

 

1,87±0,34

4,25±0,39

 

2 (7)

5 (17)

 

0

1,69±0,24**

 

 

2 (7)

Дрожжеподобные грибы

0,84±0,23**

4 (13)

6,22±0,81

30 (100)

0,77±0,31**

6 (20)

(Р<0,05), ** (Р<0,005) — в сравнении с показателями после курса антибиотикотерапии

Применение препарата повлияло на спектр эшерихий в пользу кишечных палочек с нормальными ферментативными свойствами. Их количество увеличилось в 1,8 раз по сравнению с периодом после применения антибиотика. Количество энтерококков повысилось в 1,9 раз по сравнению с периодом после выпаивания доксициклина гидрохлорида, и приблизилось к показателям до применения антибиотиков. Одним из важных результатов является выраженное снижение частоты выделяемости грибов рода кандида — у 6 щенков из 20. После курса приема эмбриоприма показатель содержания грибов рода кандида снизился до уровня, отмеченнного перед приемом антибиотика. Качественные показатели условно-патогенных энтеробактерий (УПЭ) после использования препарата такие же, как до начала эксперимента. В количественном отношении отмечены положительные тенденции, заключающиеся в уменьшении на 47% числа животных, у которых выделен энтеробактер. При этом количество собак с наличием этого микроорганизма в содержимом кишечника, в результате использования препарата, стало даже на 17% меньше, чем до применения антибиотика. После приема эмбриоприма высевается эпидермальный стафилококк только у 2 (7%) щенков, а патогенный золотистый стафилококк отсутствуют.

Выводы: таким образом, анализируя данные, представленные в таблице, можно сделать вывод о том, что препарат «Эмбриоприм» оказывает выраженное положительное влияние на облигатную, а также подавляющее действие на патогенную микрофлору кишечника экспериментальных животных, что свидетельствует о его высоких симбиотических свойствах.

Список литературы

  1. Барановский, А. Ю. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника / А. Ю. Барановский, Э. А. Кондрашина. — СПб: Питер, 2000.
  2. Блохина, И. Н. Дисбактериозы / И. Н. Блохина, В. Г. Дорофейчук. — Л.: Медицина, 1979.
  3. Бондаренко, В. М. Дисбактериозы кишечника у взрослых / В. М. Бондаренко, Н. М. Грачева, Т. В. Мацулевич. — М.: KMK Scientific Press, 2003.
  4. Гребенев, А. Л. Болезни кишечника (современные достижения в диагностике и терапии) / А. Л. Гребенев, Л. П. Мягкова. — М.: Медицина, 1994.
  5. Красноголовец, В. Н. Дисбактериоз кишечника и его клиническое значение / В. Н. Красноголовец. — М.: Медицина, 1979.
  6. Овод, А. С. Направленное формирование бактериоценоза кишечника / А. С. Овод // Ветеринария. — 2003. — № 2 — С. 23—26.
  7. Петенко, А. И. Многокомпонентный бактериальный препарат для животноводства с пробиотическими свойствами / А. И. Петенко, В. А. Ярошенко, А. Г. Кощаев // Мат. междунар. науч.-практ. конф. «Биоресурсы, биотехнологии, инновации Юга России» (Ставрополь-Пятигорск, 21—24 октября 2001 г.). — Ставрополь: Изд-во СГУ, 2003. — Ч. 2. — С. 39—41.
  8. Рекомендации Комитетам по этике, проводящим экспертизу биомедицинских исследовании. — Женева, 2000.
  9. Руководства и рекомендации для Европейских независимых комитетов по вопросам этики // Европейский форум по качественной клинической практике. — Брюссель, 1995, 1997.
  10. Тимченко, Л. Д. Экологически безопасные методы лечения и коррекции состояния здоровья продуктивных животных / Л. Д. Тимченко, И. С. Тюменцева, Е. Н. Афанасьев // Мат. междунар. науч.-практ. конф. «Биоресурсы, биотехнологии, инновации Юга России» (Ставрополь-Пятигорск, 21—24 октября 2001 г.). — Ставрополь: Изд-во СГУ, 2003. — Ч. 2. — С. 159—162.
  11. Хайруллов, Р. Г. Применение пробиотика «Спас» для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней: автореф. дис. … канд. биол. наук / Р. Г. Хайруллов. — Казань, 2007.
  12. Черешнев, В.А., Морова А.А., Рямзина И. Н. Биологические законы и жизнеспособность человека (метод многофункциональной восстановительной терапии) / В. А. Черешнев, А. А. Морова, И. Н. Рямзина. — Россия — Чехия, 2000.
  13. Черешнев, В. А. Причины и последствия разрушения природной экологической системы «макроорганизм — эндосимбионтные бактерии», выработанной в процессе эволюции и естественного отбора / В. А. Черешнев, Я. С. Циммерман, А. А. Морова // Клиническая медицина. — 2001. — № 9. — С. 4—8.
  14. Venturi, A. Impact on the composition of the faecal flora by a new probiotic preparation: preliminary data on maintenance treatment of patients with ulcerative colitis / A. Venturi, P. Gionchetti, F. Rizzella et al. // Aliment. Pharmacol. Ther. — 1999. — Vol. 13. — № 8. —P. 1103—1108.
  15. Zivkovic, R. Probiotics or microbes against microbesl / R. Zivkovic // Acta Med. Croatica. — 1999. — Vol. 53. — № 1. — P. 23–28.

Библиографическая ссылка

Тимченко Л. Д., Гандрабурова Н. И. Влияние нового биологически активного препарата «Эмбриоприм» на микробиоценоз кишечника собак при экспериментальном дисбактериозе // «Живые и биокосные системы». – 2012. – №1; URL: http://www.jbks.ru/archive/issue-1/article-5.